Нижний придаток мозга рыбы, называемый гипофизом , является железой внутренней секреции, выделяющей в кровь различные гормоны (биологически активные вещества), в том числе и гонадотропные гормоны, влияющие на рост и созревание яйцеклеток (икринок) и сперматозоидов.
Уместно применять гормональные инъекции в селекционных целях для получения быстрых и достоверных результатов. Например, если производителей золотой рыбки или ее форм сажать на нерест попарно, он часто не происходит. Если же на одну самку посадить 2...3 самца, нерест обычно удается, но в этом случае невозможно установить, какой из самцов является отцом мальков. С помощью же инъекций нетрудно стимулировать парный нерест.
В качестве гонадотропных препаратов применяют обычно ацетонированные, для длительного хранения, и высушенные гипофизы сазана, леща, плотвы и других рыб. Гипофиз нужно растереть в фарфоровой ступке в порошок, а затем к порошку добавить немного дистиллированной воды, чтобы получилась суспензия, которую шприцем вводят производителям в мышцы спины, немного ниже основания D, направляя иглу в сторону головы. Иглу следует вынимать осторожно. Место прокола прижать пальцем и слегка помассировать, чтобы введенный препарат не вытекал. Для форм золотой рыбки количество гипофиза представлено в табл. 5. Оптимальный срок созревания гонад при таких дозах и при Т 25 °С равен 12 ч, после чего самку вынимают из воды, обтирают сухой марлей, чтобы на отцеживаемую икру не попала вода, и, слегка массируя брюшко в направлении к половому отверстию, сцеживают икру в сухую чашку. Затем таким же образом сцеживают сперму у самца. Сперму удобно набирать в глазную пипетку. После этого сперму добавляют в икру (примерно 1 каплю на 5 г икры), перемешивают птичьим пером, а затем добавляют воду, чтобы она слегка покрывала икринки, продолжая перемешивание. Продолжительность движения сперматозоидов в воде около 70 с. Через 2...3 мин 3/4 объема воды сливают, не прекращая перемешивания, затем проделывают это еще дважды, после чего икру помещают на инкубацию. Икринки золотой рыбки очень клейкие и при недостаточно энергичном перемешивании могут слипнуться, что приведет к их гибели. Инкубировать икринки можно, поместив их так, чтобы они не слипались, на марлю или мельничный газ, натянутые на рамки из оргстекла. Рамки помещают в хорошо аэрируемый аквариум. Погибшие икринки нужно сразу удалять. Можно инкубировать икру и в аппарате Вейса, но в этом случае икринки предварительно надо обесклеить, насыпав в чашку, где будут перемешиваться икра, тальк или крахмал. Аппарат Вейса представляет собой стеклянный сосуд в виде цилиндра, сужающийся книзу (наподобие широкой бутылки без дна), нижнее отверстие которого плотно закрыто пробкой с проходящей насквозь трубкой, через которую под напором подается вода, поддерживающая икринки во взвешенном состоянии и стекающая через расположенный сверху слив. Напор воды подбирается таким образом, чтобы в верхней части аппарата он ослабевал и икринки опускались вниз, где снова подхватывались бы током воды. В 8-литровый аппарат Вейса нужно помещать около 50 г икры.
5. Дозы порошка гипофиза сазана для форм золотой рыбки, мг
Масса рыбы, г | Самки | Самцы | Масса рыбы, г | Самки | Самцы |
30...50 | 0 3 | 0,1 | 170...200 | 0,8 | – |
50...80 | 0,4 | 0,2 | 200...230 | 1,0 | – |
80...110 | 0,5 | 0,3 | 230...260 | 1,2 | – |
110...140 | 0,6 | 0,4 | 260...300 | 1,4 | – |
140... 170 | 0,7 | 0,5 | 300...350 | 1,6 | – |
Разные порции икры от одной самки можно оплодотворить спермой нескольких самцов, или наоборот. Отдельное выращивание пометов дает возможность определить по потомству качество производителей и выбирать оптимальные варианты.
Чтобы сопоставлять содержание гонадотропного гормона в гипофизах разных видов рыб, применяется биологическое тестирование на животных (тест-объектах). Чаще для этой цели используются вьюны или лягушки. Одна вьюновая единица (В. Е.) – минимальная доза гонадотропного гормона, вызывающая через 30–50 ч после инъекции созревание икры и овуляцию (процесс выхода икринки из яичника самки) у зимних самок вьюна IV стадии зрелости массой 35...45 г при Т 16...18 °С. Чтобы выяснить это, нескольким группам самок одновременно проводят инъекции различными дозами. Быстрее качество гипофизов рыб определяется, если тест-объектом служит лягушка. Положительной реакцией в этом случае считается появление подвижных сперматозоидов в клоаке самца после инъекции суспензии гипофиза в спинные лимфатические мешки. Одна лягушачья единица (Л. Е.) – минимальное количество препарата гипофиза рыбы, вызывающее реакцию спермиации у одного самца лягушки.
Общее количество физиологического раствора или дистиллированной воды, являющихся компонентами суспензии, вводимых рыбе могут несколько варьировать, но необходимая доза препарата должна быть введена полностью. При этом для получения зрелой спермы у самцов достаточно ввести 2/3 или 1/2 дозы, применяемой для самок того же вида. Биологическая активность препарата ацетонированных гипофизов сазана составляет обычно 3,2...3,5 (в среднем около 3,3) Л. Е. в 1 мг препарата.
Гипофизы можно заготовить самому. Для этого нужно взять половозрелую живую рыбу с гонадами в IV стадии зрелости, по 6-балльной шкале, вскрыть у нее череп и пинцетом осторожно, чтобы не раздавить или не разорвать, извлечь гипофиз. Для длительного хранения гипофизы опускают в безводный химически чистый ацетон с целью обезвоживания и обезжиривания. Сначала в один сосуд с ацетоном на 12 ч, затем в другой сосуд со свежим ацетоном на 6...8 ч. Объем ацетона должен в 10... 15 раз превышать объем находящихся в нем гипофизов. Затем гипофизы раскладывают на фильтровальной бумаге и просушивают на воздухе. Высушенные гипофизы помещают в сухую пробирку или флакон и герметически закупоривают. Для большей сохранности их нужно хранить в сухом помещении, желательно в холодильнике при T от 0 до 5 °С. В этом случае их активность сохраняется в течение нескольких лет, хотя и понижается со временем. При инъекциях доза порошка, полученного из старых гипофизов, должна быть немного выше. Но лучше не хранить гипофизы дольше 2 лет.
Для многих видов рыб надежным и удобным заменителем препарата гипофиза для стимуляции созревания половых клеток является хорионический гонадотропин, получаемый от млекопитающих и выпускаемый фармацевтической промышленностью в виде обезвоженного под вакуумом порошка. Одна его единица действия (ЕД) соответствует 0,1 мг порошка. Выпускают его в герметически закрытых флаконах по 500, 1000, 1500 и 2000 ЕД, к флакону прилагаются ампулы с растворителем. Этот препарат называется хориогонином. Биологическая активность хориогонина определяется в мышиных единицах (М. Е.).
Для стимуляции самок судака в зависимости от Т требуется от 200 М. Е. (при Т 12...15 °С) до 500 М. Е. (при 9...10 °С) хориогонина. При этом продолжительность созревания самок может быть различной – от 45 до 96 ч. Самцам судака в зависимости от Т вводят от 50 до 150 М. Е. Естественно, что для более мелких аквариумных рыб дозы будут значительно меньше.